كيفية تشخيص أمراض الاسماك البكتيرية
يجب أن تتم الفحوصات المختبرية على الاسماك الحية او الميتة توا والتي لم يطرأ على موتها زمن طويل وخصوصا في حالة التعرض للاصابات الطفيلية الخارجية لانها قد تترك جسم السمكه.كما ان بعض الاعضاء الداخليه والعضلات قد تتفسخ ولاتصلح للفحص لذلك يتطلب حفظها في حاوية نظيفة محاطه بالثلج اثناء نقلها الى المختبر للتشخيص
تعقيم الادوات المختبرية
1-التعقيم الرطب:-ويتم ذلك بتعريض الاوساط الزرعية,القطن,الشاش.لدرجه حراره مقدارها 121م ولمدة لاتقل عن 20دقيقه
2-التعقيم الجاف:-ويتم من خلال تعريض جميع الاجهزة المختبرية لدرجه حراره مقدارها 170م ولمدة لاتقل عن ساعة
تحضير الموادد
1-تحضير الوسط الزرعي.ويتم ذلك من خلال أذابة مكونات الوسط في 500سم3ماء مقطر ثم التعقيم بالاوتوكليف والانتظار لحين التبريد ب45م ويصب في الاطباق
تحضير الصبغات
1-صبغة كاربل جنشن.يطحن 2غم من carbal gention violet ويضاف أليها 10سم3 كحول و100سم3 حامض الكاربوليك 1%
2-محلول لوكال:يحضر بأذابة 2غم أيوديد البوتاسيوم في 5-10سم3ماء مقطر ثم يضاف 1غم يود ويكمل حجم المحلول الى 300سم3 وذلك باضافة الماء المقطر ثم يرشح المحلول قبل الاستعمال
3-صبغة زيل:يطحن 1غم من basic carbol fuchsin ويضاف اليه 2-3قطرات كليسرول ثم يضاف للخليط بالتدرج 100سم3 من الكحول بعد ذلك تضاف 100سم3ماء مقطر.يحفظ المحلول بعد ذلك في الحاضن ويرشح قبل الاستعمال
طريقة التشخيص:
1-تثبت اللطخه على الشريحه الزجاجية
2-تضاف صبغه كاربل جنشن لمده 5,0-1 دقيقة على النموذج
3-تزال الصبغة بدون غسل وتعامل الشريحة بمحلول لوكال لمدة دقيقة واحدة
4-تغمس الشريحة في الكحول من 5,0-1 دقيقة ثم تغسل بالماء
5-تضاف صبغة زيل لمدة 5,0-1 دقيقة ثم تغسل وتجفف..البكتريا المحافظة على الصبغة تعتبر موجبة لصبغة كراك أما التي تفقد الصبغة فهي سالبة
الزرع:يمرر النموذج المراد فحصه (غلاصم,كبد,الخ)على 3-4أطباق بتري حاوي الوسط الزرعي المطلوب وللكشف عن البكتريا البوغية يسخن النموذج المراد فحصه لمدة 20-30دقيقة بدرجة حراره 80م.ثم يزرع بعد ذلك ويحضن في الحاضن.
دراسة هيئة وخصائص البكتريا: وتشمل فحص الحركة_الخصائص الكيمياوية
الخصائص الكيماويه:وتشمل تحلل البروتين-تحرر الاندول-تحرر كبريتيد الهيدروجين-تحرر الامونيا-اختزال النترات-تخمر الكربوهيدرات-الاوكسيديز-الكتليز-البيروكسيديز-والcoagulase
-تشخيص البكتريا الموجبة لصبغة كرام
البكتريا الموجبة لصبغة كرام لاتشكل اهميه تذكر في امراض اسماك الكارب ورغم ذلك فان هنالك بعض الحالات المرضية قد تحصل عن الاصابة ببعض انواع المكورات عند توفر الظروف المناسبة لها وهي تنجم في الغالب من التسميد الخاطئ بفضلات الحيوانات والدواجن
بالامكان تشخيص هذه المكورات مختبريا بواسطة المجهر.ويعتبر الدم الوسط الزرعي المنتخب لها (Blood agar)كما ان هناك اوساط زرعيه خاصة يمكن الاستعانه بها فيما لوطلب ذلك مثل Staphlococcus 110 medium أو Glycine tellurite agar حيث تتلون المكورات العنقوديه النامية عليها باللون الاسود اللماع.
تشخيص البكتريا السالبة لصبغة كرام
بعد أن تعرف البكتريا بأنها سالبة لصبغة كرام سيتم تصنيفها عندئذ الى عصيات قصيرة Short rods تتراوح أطوالها 1_2ميكرون وتضم الEnterics,Aeromonads,Pseudomonads, وعصيات طويلة Long-thin rods من مجموعة الMyxobacteria تتراوح أطوالها 5-12 ميكرون
تزرع العصيات القصيرة على الاوساط الزرعية التالية
Trypticase Soya agar,Pseudosel agar ويعتبر الوسط الزرعي السيدوسيل وسطا أوليا لعزل الPseudomonads لانه يحتوي على الستريمايد Cetrimide المانع لنمو معظم انواع البكتريا السالبة لصبغة كرام.بالامكان عزل البكتريا Pseudomonas fluoressens في هذا الوسط بعد حضنه بدرجة حرارة 20م لمدة 48ساعة
للتأكد من عزل جميع انواع البكتريا المحبة للبرودة Psychrophilic أو المحبة للحرارة المعتدلة Mesophilic بالامكان الاستعانة بالوسط الزرعي Trypticase soya agar ويرمز T.S.A بحيث تحتضن بعض الزروعات بدرجة حرارة 20م والبعض الاخر بدرجة حرارة 35م.
أن المستعمرات النامية في هذا الوسط يتم أختبارها لمعرفة الاتي:-
1-هل البكتريا قادرة على الحركة أم لا
2-هل أنزيم السايتوكروم اوكسيديز Cytochrome oxidase فيها موجبا أو سالبا
3-هل تظهر صبغة قهوائية واضحة عند حضنها بدرجة حرارة 20م
